与细胞直接接触的所有溶液和设备都必须无菌。
始终使用适当的无菌技术，并在层流罩中进行操作。在细胞达到汇合之前处于对数期生长时进行传代。达到汇合状态时，悬浮细胞会聚集成团块，涡旋培养瓶时，培养基会变得浑浊。推荐的传代前最大细胞密度因细胞系而异；有关详细信息，请参阅细胞特定产品说明书或手册。
在摇瓶中生长的细胞
以下方案描述了在摇床培养箱中使用摇瓶对悬浮培养物中生长的哺乳动物细胞进行传代的通用步骤。具体方案，请始终参阅细胞特定产品说明书。
- 当细胞准备好进行传代（即处于达到汇合状态之前的对数生长期）时，请从培养箱中取出培养瓶并使用无菌移液器从培养瓶中取出少量样本。如果细胞在取样前已经沉淀，则旋转培养瓶使细胞均匀分布在培养基中。
- 使用 Countess 自动细胞计数仪或血细胞计数器、细胞计数仪和台盼蓝拒染法，测定样本中的细胞总数和活细胞百分比。
- 计算您需要添加的培养基的量，以将培养物稀释到建议的接种密度。
- 在无菌条件下将适量的预热生长培养基添加到培养瓶中。如需要，您可以将培养物分为若干小份，加入多个培养瓶。
- 将培养瓶的盖子拧松一整圈，以便进行适当的气体交换（或使用透气盖），然后将培养瓶放回摇床培养箱中。振荡速度取决于细胞系。
在转瓶中生长的细胞
以下方案描述了使用转瓶对悬浮生长的哺乳动物细胞进行传代的通用步骤。具体方案，请始终参阅细胞特定产品说明书。
我们不建议直接在大于500 mL的转瓶中直接开始旋转培养。我们建议从已经验证的小体积转瓶开始逐步扩大培养规模。
- 当细胞准备好进行传代（即处于达到汇合状态之前的对数生长期）时，请从培养箱中取出培养瓶并使用无菌移液器从培养瓶中取出少量样本。如果细胞在取样前已沉淀，则涡旋培养瓶以使细胞在培养基中均匀分布。
- 使用 Countess 自动细胞计数仪或血细胞计数器、细胞计数仪和台盼蓝拒染法，测定样本中的细胞总数和活细胞百分比。
- 计算您需要添加的培养基的量，以将培养物稀释到建议的接种密度。
- 在无菌条件下将适量的预热生长培养基添加到培养瓶中。如有需要，可将培养物分装至多个培养瓶中。
- 将转瓶的侧臂盖拧松一整圈，以便进行适当的气体交换，然后将转瓶放回培养箱中。旋转速度取决于细胞系和叶轮类型。确保旋转速度保持在推荐值范围内，以避免因剪切应力损坏细胞。
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